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Genome-CRISP™ Cas9 穩定表達細胞系

介紹

GeneCopoeia 提供 Cas9 核酸酶的穩定表達細胞系。這些細胞系能為您的 CRISPR 基因組編輯應用提供一個方便、高效的工具。

我們會提供預制的Genome-CRISP™ Cas9 人類或小鼠穩定表達細胞系,如H1299或HEK293T。Cas9 核酸酶的基因已被穩定整合到這些細胞系基因組上的 safe harbor 位點(圖1)。此外,我們也能將 Cas9 核酸酶基因穩定整合到您所指定的細胞系基因組。 

Cas9 核酸酶與 sgRNAs 這個組合被廣泛用于在真核細胞乃至動物模型上生成靶向基因組修飾,包括基因敲除、突變修飾、內源基因融合標簽以及更多其他應用。而基因組上的 safe harbor 位點整合了 Cas9 基因的單克隆人類細胞系能保證該基因表達的安全性、可靠性以及持續性。

優勢

  • Cas9 穩定整合將 sgRNA 共轉染或共轉導操作的需求降到最低,是高通量 sgRNA 應用的理想選擇。
  • Safe Harbor 位點整合能確保穩定的 Cas9 表達,同時對細胞無副作用。
  • 單克隆細胞系能保證單一基因背景下持續的、高水平的 Cas9 表達。
  • 可配合GeneCopoeia Genome-CRISP™ sgRNA 克隆sgRNA文庫以及供體克隆服務使用。

 

CBh-Cas9-AAVS1

圖 1. Cas9 核酸酶穩定表達結構的示意圖。Cas9 核酸酶基因被裝載到到 GeneCopoeia 的人類 AAVS1 safe harbor 敲入克隆載體。該載體的結構配合 GeneCopoeia 的safe harbor 基因敲入技術,能將 Cas9 核酸酶基因敲入到人類第19號染色體上的 AAVS1 位點。單克隆分離通過嘌呤霉素(Puro)藥篩實現。

人類基因組 AAVS1 位點上的穩定整合確保了 Cas9 核酸酶基因持續穩定的表達。通過以下的 T7 核酸內切酶 I 錯配酶切檢測,我們可以看到 在 AAVS1 位點上 的Cas9 核酸酶基因表達量及活性水平都相當高。(圖2)

Cas9 stable cell lline T7EI assay validation

圖 2. 穩定表達細胞系活性驗證。用靶向 HUWE I 基因的 sgRNA 質粒轉染 AAVS1 位點穩定整合 Cas9 核酸酶基因的人類 H1299 細胞系。24 小時后,收集細胞用于取基因組 DNA。使用GeneCopoeia IndelCheck 檢測體系擴增sgRNA靶向的序列區,對 PCR 產物進行解鏈和退火處理,對照組不作處理,實驗組用 T7 核酸內切酶進行錯配酶切。實驗組酶切產物跑膠獲得預期的酶切條帶,即能證明 Cas9 在這些細胞系中有活性。 

 

更多關于基因組編輯的問題,請見

基因組編輯常見問題 FAQ

 

 

 

訂購

Genome-CRISP™ Cas9 穩定表達細胞株

直接轉染或轉導sgRNA便可進行基因組編輯實驗。對于高通量實驗尤其方便。

訂購 新貨號 產品 細胞系 篩選標記 Cas9 整合位點 產品規格 定價(¥)
SL501 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的人類 H1299 單克隆細胞系 H1299 Puro AAVS1 1管,每管細胞數2x106 10000
SL502 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的人類 HEK293T 單克隆細胞系 HEK293T Puro AAVS1 1管,每管細胞數2x106 10000
SL503 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的 人類 HeLa 單克隆細胞系 HeLa Hygro AAVS1 1管,每管細胞數2x106 10000
SL504 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的 人類 A549 單克隆細胞系 A549 Hygro AAVS1 1管,每管細胞數2x106 10000
SL505 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的人類 HEK293T單克隆細胞系 HEK293T Puro AAVS1 1管,每管細胞數2 x106 10000
SL506 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的小鼠 Neuro2a單克隆細胞系 Neuro2a Puro ROSA26 1管,每管細胞數2x106 10000
SL507 穩定表達誘導型 Cas9 核酸酶基因的人類 HEK293T 單克隆細胞系 HEK293T Hygro AAVS1 1管,每管細胞數2x106 10000
SL508 穩定表達誘導型 Cas9 核酸酶基因的小鼠 Neuro2a 單克隆細胞系 Neuro2a Hygro ROSA26 1管,每管細胞數2x106 10000
SL509 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的小鼠 Neuro2a 單克隆細胞系 Neuro2a Hygro ROSA26 1管,每管細胞數2x106 10000
SL510 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的小鼠 Neuro2a 單克隆細胞系 Neuro2a Puro ROSA26 1管,每管細胞數2x106 10000
SL511 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的小鼠 Neuro2a 單克隆細胞系 Neuro2a Neo ROSA26 1管,每管細胞數2x106 10000
SL514 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的人類MCF- 7單克隆細胞系 MCF- 7 Hygro AAVS1 1管,每管細胞數2x106 10000
SL515 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的人類MDA-MB-231單克隆細胞系 MDA-MB-231 Hygro 隨機整合 1管,每管細胞數2x106 10000
SL516 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的人類MDA-MB-468單克隆細胞系 MDA-MB-468 Hygro 隨機整合 1管,每管細胞數2 x106 10000
SL517 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的人類T47D單克隆細胞系 T47D Hygro AAVS1 1管,每管細胞數2x106 10000
SL518 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的人類HepG2單克隆細胞系 HepG2 Hygro AAVS1 1管,每管細胞數2x106 10000
SL520 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的人類AGS單克隆細胞系 AGS Hygro 隨機整合 1管,每管細胞數2x106 10000
SL521 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的人類BxPC-3單克隆細胞系 BxPC-3 Hygro 隨機整合 1管,每管細胞數2x106 10000
SL522 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的人類SNU475單克隆細胞系 SNU475 Hygro 隨機整合 1管,每管細胞數2x106 10000
SL523 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的人類HT-29單克隆細胞系 HT-29 Hygro 隨機整合 1管,每管細胞數 2x106 10000
SL524 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的人類MCF-7單克隆細胞系 MCF-7 Hygro 隨機整合 1管,每管細胞數 2x106 10000
SL526 穩定表達 Cas9 核酸酶基因的人類SNU‐1單克隆細胞系 SNU‐1 Hygro 隨機整合 1管,每管細胞數 2x106 10000

 

 

人類 AAVS1 & 小鼠 ROSA26 Safe Harbor 基因敲入試劑盒 1.0版 

購買 貨號 產品 描述 價格(¥) 促銷價(¥)
SH-AVS-K100 Genome-TALER™ 人類 AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒t 包括:
AAVS1 TALEN 組合(TN-AAVS1 )
AAVS1 供體克隆載體 (DC-DON-SH01))
AAVS1 陽性對照供體克隆 (DC-RFP-SH01)
基因敲入驗證引物組合(HQPAVSHR)
11160 6680
SH-AVS-K000 Genome-TALER™ 人類 AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒(不含載體) 包括:
AAVS1 TALEN 組合(TN-AAVS1 )
AAVS1 陽性對照供體克隆 (DC-RFP-SH01)
基因敲入驗證引物組合(HQPAVSHR)
(HQPAVSHR)
9560 5730
SH-AVS-K200 Genome-CRISP™ 人類 AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒 包括:
AAVS1 sgRNA/Cas9 表達克隆 (HCP-AAVS1-CG02)
AAVS1 供體克隆載體 (DC-DON-SH01)
AAVS1 陽性對照供體克隆 (DC-RFP-SH01)
基因敲入驗證引物組合(HQPAVSHR)
11160 6680
SH-AVS-K002 Genome-CRISP™ 人類AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒(不含載體) 包括:
AAVS1 sgRNA/Cas9 表達克隆 (HCP-AAVS1-CG02)
AAVS1 陽性對照供體克隆 (DC-RFP-SH01)
基因敲入驗證引物組合(HQPAVSHR)
9560 5730
SH-ROS-K000 Genome-TALER™
小鼠 ROSA26 safe harbor 基因敲入試劑盒(不含載體)
包括:
ROSA26 TALEN 組合 (TN-ROSA26)
ROSA26 陽性對照供體克隆 (DC-RFP-SH02)
基因敲入驗證引物組合(MQPROSHR)
9560 5730
SH-ROS-K002 Genome-CRISP™
小鼠 ROSA26 safe harbor 基因敲入試劑盒(不含載體)
包括:
ROSA26 sgRNA/Cas9 表達克隆 (MCP-ROSA26-CG01)
ROSA26 陽性對照供體克隆 (DC-RFP-SH02)
基因敲入驗證引物組合(MQPROSHR)
9560 5730
SH-ROS-K100 Genome-TALER™
小鼠 ROSA26 safe harbor 基因敲入試劑盒t
包括:
ROSA26 TALEN 組合(TN-ROSA26)
ROSA26 供體克隆載體 (DC-DON-SH02)
ROSA26 陽性對照供體克隆 (DC-RFP-SH02)
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SH-ROS-K200 Genome-CRISP™
小鼠 ROSA26 safe harbor 基因敲入試劑盒
包括:
ROSA26 sgRNA/Cas9 表達克隆 (MCP-ROSA26-CG01)
ROSA26 供體克隆載體 (DC-DON-SH02)
ROSA26 陽性對照供體克隆 (DC-RFP-SH02)
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  多種 小鼠 ROSA26 ORF 敲入克隆 由 CMV 啟動子啟動 ORF 表達。能將 ORF 或您的目的基因敲入小鼠 ROSA26 safe harbor 位點。 -

 

 

 

Cas9 人類 AAVS1 & 小鼠 ROSA26 safe harbor 敲入克隆

點擊轉導我們的人類 AAVS1 & 小鼠 ROSA26 Safe Harbor 試劑盒及敲入克隆產品網頁

裝載Cas9 基因表達結構的safe harbor供體克隆。能與safe harbor基因敲入試劑盒配合使用,將 Cas9 基因敲入到人類 AAVS1 或小鼠 ROSA26 safe harbor 位點。

訂購 新貨號 舊貨號 產品 啟動子/篩選標記 Cas9整合位點 價格(¥)
SH300 DC-C9NU-03 人類 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克隆 CBh/ Puro AAVS1 4000
SH301 DC-C9NU-04 人類 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克隆 CBh/ Hygro AAVS1 4000
SH302 DC-C9NU-05 人類 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克隆 CBh/ Neo AAVS1 4000
SH350 DC-C9NU-06 小鼠 ROSA26 safe harbor Cas9 敲入克隆 CBh/ Puro ROSA26 4000
SH351 DC-C9NU-07 小鼠 ROSA26 safe harbor Cas9 敲入克隆 CBh/ Hygro ROSA26 4000
SH352 DC-C9NU-08 小鼠 ROSA26 safe harbor Cas9 敲入克隆 CBh/ Neo ROSA26 4000
SH304 DC-C9NU-09 誘導型人類 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克隆 Tet inducible/  Puro AAVS1 4000
SH305 DC-C9NU-10 誘導型人類 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克隆 Tet inducible/  Blast AAVS1 4000
SH306 DC-C9NU-11 誘導型人類 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克隆 Tet inducible/  Hygro AAVS1 4000
SH354 DC-C9NU-12 誘導型小鼠 ROSA26 safe harbor Cas9 敲入克隆 Tet inducible/  Puro ROSA26 4000
SH355   誘導型小鼠 ROSA26 safe harbor Cas9 敲入克隆 Tet inducible/  Hygro ROSA26 4000

 

應用

  • 使用大量單獨或混合的 sgRNA 進行高通量篩選是藥物靶標研究的理想方法(圖2)。
  • 方便同時對數個候選藥物靶標進行驗證。
  • Cas9 穩定表達細胞系作為模型細胞系,具有生長迅速、易于轉染或轉導等特點。您可以在使用自己的細胞系進行轉染/轉導前,利用這個細胞系對 sgRNA 的活性進行驗證;當 sgRNA 在您的細胞系中顯示很少甚至無活性時,也可以利用它進行排查和疑難分析。

 

 

 
培養著 Cas9 穩定表達細胞系的96孔板
     Cas9-expressing_stable_cell_lines
轉染或轉導 sgRNA 文庫
對轉染或轉導后的平板進行篩選(如基因敲除導致的細胞死亡)

圖 2. 使用 Genome-CRISP™ sgRNA 文庫進行藥物靶標研究的應用示例。 上:96孔板培養能穩定表達Cas9核酸酶的細胞系。中:使用 sgRNAs 文庫(獨立克隆文庫或混合文庫)對板上的 Genome-CRISP™ Cas9 穩定表達細胞系進行轉染或轉導。下:對轉染后的96孔板進行針對細胞死亡的篩選(圖為黑孔)。每個sgRNA都帶有barcode序列,因此相關的單個或多個sgRNA能被識別出來,列作藥物靶標的候選。

 

 

客戶定制細胞系

GeneCopoeia 也提供穩定細胞系構建服務。您可以指定所需的細胞系,由我們為您將 Cas9 核酸酶或 Cas9 D10A 切口酶基因敲入到人類 AAVS1 或小鼠 ROSA26 safe harbor 位點。

此外,我們可以在您指定的細胞系基因組里通過CRISPR或TALEN技術引入近乎任意修飾,如基因敲除、突變修飾或融合標簽。我們的服務涵蓋CRISPR或TALEN靶點選擇、工具克隆構建及驗證、供體克隆設計及構建、轉染還有單克隆細胞系分離。穩定細胞系服務聯系可通過以下郵箱[email protected],或填寫以下表格