Monthly Archives: 九月 2012

GeneCopoeia提供其他物種的ORF克隆嗎?

回答:我們目前提供已構建的人、小鼠ORF克隆。我們正要推出其他模式動物(如大鼠)的全長ORF克隆。如果您擁有感興趣的模式動物基因的全長ORF序列,請提供給我們這些基因的基本信息(GenBank Accession或核酸序列),我們會優先將這些基因克隆到載體上。收取的費用和目錄上的ORF克隆一樣。我們還提供將人、小鼠基因克隆到特定載體的定制服務。
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我做了表達實驗,但卻沒有目標蛋白的表達,為什么?

回答:一個帶有啟動子的正確的ORF DNA序列并不能保證相應的蛋白的表達。影響重組蛋白表達的因素很多:1)你選用的的表達載體是否與你的宿主相匹配,如pReceiver-M01是在哺乳動物細胞中表達的,而pReceiver-B01則是在細菌里表達的。2)如果表達的是一個膜蛋白,它是否需要在細胞內定位的靶序列。3)過量表達的蛋白對宿主是否存對表達宿主細胞有毒性作用?4) 該蛋白質是否正確折疊成有功能或者能適合免疫分析所需的三級結構?5)如果用一特異的單克隆抗體檢測蛋白表達,最好做全長ORF的DNA測序以確定你是否得到一個不同的ORF剪接體。  
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你們對每一個基因都做過表達了嗎?

回答:我們對所有全長ORFs進行了 用pReceiever-B01載體和一種表達宿主細胞(E. coli)在一種表達條件的表達實驗。我們沒有用其它表達宿主細胞和其它表達條件對所有全長ORFs進行蛋白表達的檢測。  
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通過全序列測序,我發現這是我感興趣的基因中的一個可變剪接體,你們能重新克隆或替換它嗎?

回答:我們將盡最大的努力克隆原始的剪接形式,為你提供有償替換的克隆。但是,我們無法保證得到特異的剪接體的克隆,也無法確定獲得的克隆的具體日期。
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在序列上有一個核苷酸堿基的改變,而且它所編碼的氨基酸正是位于許多文獻上報道的蛋白的活性位點,你們將會如何處理?

回答:對于這類情況,盡管我們不提供無償克隆替換,但是我們可以以最低價提供突變服務(可以改變任意地核苷酸組成)。
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因為是用PCR的方法擴增全長ORFs,你們將如何處理從你們那里購買的由于PCR產生的突變的ORF克隆?

回答:我們的系統結合了一些新的、高保真的PCR專利技術,這些方法可以使擴增全長ORFs的保真度提高10倍。它是通過在低的反應溫度下減少引物與模板DNA 的非特異結合以及減少擴增所需的循環數來達到高保真的目的的。由于遺傳多態性和基因的多選擇性剪接方式,我們只保證在我們的全長ORF序列沒有移碼突變也不會引入終止密碼子。如果發生上述情況,我們將更換有問題的克隆或者退還所收費用。
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如何解釋你們實際序列與GenBank上序列的差異?

回答:有兩種不同的可能或兩者兼而有之的可能:1)自然因素,包括遺傳多態性、選擇性剪接方式、NCBI數據庫注釋的更新導致基因的多個版本、數據遞交者的DNA測序的錯誤或著模糊不清;2)PCR過程導致的改變。購買ORF克隆的用戶往往只是將我們的ORF測序與數據庫的基因的某個參照版本的序列進行比較,而把任何的差異都認為是由于PCR產生的突變。通過對將近20,000我們克隆的人類基因的多個克隆的分析,比較了我們的序列與數據庫的所有的轉錄本和相應基因座上的序列包括基因組序列、ESTs、其他cDNA/mRNA 轉錄本,我們發現大部分差異很明顯來源于遺傳多態性和選擇性剪接方式而不是PCR產生的。 我們的ORF序列與相應的基因組的差異要比數據庫發表的基......
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你們是如何生產全長的ORF的?

回答:我們結合多種專利技術以提高PCR的保真度,通過PCR把全長的ORF擴增出來(詳見ORF白皮書)。我們采用70多種人組織cDNA 文庫作為模板來生產全長ORF。  
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我想對ORFs進行測序,我需要用什么引物?

回答:對于ORFEXPRESS™ 穿梭克隆,正向測序引物(ORF 5'端上游)是:5'-CCCAGTCACGACGTTGTAAAACG,反向引物(ORF 3'端下游)是5'-ATGGTCATAGCTGTTTCCTG。對于OmicsLink™ clones,你可在我們的網頁上查閱測序引物的序列。
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你們是如何對你們的克隆進行質量控制的?

回答:我們對每一個全長ORF克隆進行了測序。另外,在每個克隆投遞給你之前,我們會再次用ORF特異性的核酸引物進行PCR驗證,確保投遞的克隆正確無誤。
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我在你們公司的網頁的數據庫中找不到我所需要的基因,你們能為我克隆該基因嗎?價格如何?

回答:是的,我們可以為你克隆你所需要的基因。我們的目標是克隆人類所有基因的全長ORF,我們正朝這方面努力。你所感興趣的基因有可能已在我們的生產線上或即將進行克隆。如果你給我們提供GenBank 登記號、基因名稱、核苷酸或氨基酸序列的信息,我們會將該基因安排到優先生產的列表上,盡快為你克隆。通常完成克隆需要兩周的時間,盡管我們不能完全保證能在這時間內得到該基因。一旦克隆成功我們會盡快通知你。這項服務不需要附加費用。  
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